Immunostaining study of cytokeratins in human hair follicle development

Abstract Background: The hair follicle is a unique structure, one of the most dynamic structures in mammalians, which can reproduce in every new cycle all the mechanism involved in its fetal development. Although a lot of research has been made about the human hair follicle much less has been discovered about the importance of the cytokeratins (CKs) in its development. Objective: Study the immunohistochemical pattern of epithelial CKs during human hair follicle development. Methods: We performed an immunohistochemical study using fresh post-mortem skin biopsies of human fetuses between 4 and 25 weeks of gestational age to study the expression of cytokeratins (CKs): CK1, CK10, CK13, CK14, CK16 and CK20 during human hair follicle fetal development. Study limitations: Restrospective study with a good number of makers but with a small population. Results/conclusion: We found that, the CKs were expressed in an intermediate time during follicular development. The epithelial CKs (CK1, CK14, CK10, CK13) and the epithelial CKs with a proliferative character such as CK16 were expressed first, as markers of cellular maturation and follicular keratinization. At a later phase, CK20 was expressed in more developed primitive hair follicles as previously discussed in literature.

Melanoma primário da mucosa oral: estudo imunoistoquímico e molecular da via da MAPK / Primary oral mucosal melanoma: an immunohistochemistry and molecular study of MAPK pathway

INTRODUÇÃO: O melanoma primário da cavidade oral é uma neoplasia agressiva, rara e originada a partir da proliferação de melanócitos malignos da mucosa. Ele representa aproximadamente de 0,2 a 8 por cento de todos os melanomas. Estudos recentes apontam algumas vias moleculares tem sido encontradas por estarem envolvidas na patogenia dos melanomas. Dentre essas vias destaca-se a via proliferativa da MAPK (mitogen activated protein kinase), esta cascata de sinalização está envolvida no controle do crescimento celular, proliferação e migração, e tem sido relacionada com um papel importante no desenvolvimento e progressão do melanoma cutâneo. OBJETIVOS: Analisar a expressão proteica e mutação pontual dos componentes da via MAPK e correlacionar com os dados clínicos-histológicos. MATERIAL E MÉTODOS: Através da imunoistoquímica avaliar a expressão proteica dos anticorpos RAS; BRAF; MEK1; MEK2; ERK1 e ERK2 em 35 casos de melanomas orais organizados em matriz (TMA: Tissue Microarray) e através de pirosequenciamento avaliar a mutação pontual dos genes BRAF; NRAS; KRAS em 14 casos de melanomas orais. RESULTADOS: Idade dos pacientes entre 9 e 91 anos, sem predileção por sexo, 75 por cento caucasianos, 71,42 por cento acometeram o palato, 80 por cento com aspecto histológico grau III. A análise da expressão proteica foi: RAS (28,57 por cento); BRAF (82,85 por cento); MEK1 (0 por cento); MEK2 (51,43 por cento); ERK1 (20 por cento)e ERK2 (74,28 por cento). Na análise molecular observamos mutações para BRAF (9/14 casos) e NRAS (2/14 casos). CONCLUSÃO: Todos os aspectos da via MAPK necessita de outras elucidações em melanomas de áreas foto-protegidas e melanomas de mucosa e comparando diferentes populações. Entretanto, os resultados deste presente estudo apontam importante alterações na cascata RAS-RAF-MEK-ERK e estes são indicadores de prognóstico ruim em melanomas primários da mucosa oral, independente da exposição solar...

BACKGROUND: Primary melanoma of the oral cavity is an aggressive and rare neoplasm and originated from the proliferation of malignant melanocytes of the mucosa. It represents approximately 0.2 to 8 percent of all melanomas. Recent studies indicate some molecular pathways have been found to be involved in the pathogenesis of melanomas. Among these means there is a proliferative MAPK pathway ("mitogen activated protein kinase"), this signaling pathway is involved in controlling cell growth, proliferation and migration, and it has been associated with a role in the development and progression of melanoma skin. OBJECTIVES: To analyze protein expression and mutation of components of the MAPK pathway and to correlate with the clinical, histological data. MATERIALS AND METHODS: Using immunohistochemistry to evaluate the protein expression of RAS, BRAF, MEK1, MEK2, ERK1 and ERK2 antibodies in 35 cases of oral melanomas organized array (TMA: Tissue Microarray) and using pyrosequencing to assess the mutation of the BRAF, NRAS, KRAS in 14 cases of oral melanomas. RESULTS: Age of patients between 9 and 91 years, regardless of gender, 75 percent Caucasian, 71.42 percent in palate, 80 percent with histologic grade III. Analysis of protein expression was: RAS (28.57 percent); BRAF (82.85 percent); MEK1 (0 percent), MEK2 (51.43 percent); ERK1 (20 percent) and ERK2 (74.28 percent). Molecular analysis we found BRAF mutations (9/14 cases) and NRAS (2/14 cases). CONCLUSION: All aspects of the MAPK pathway requires further elucidation in melanomas of photo-protected areas and mucosal melanomas and comparing different populations. However, the results of this study indicate important changes in the cascade RAS-RAF-MEK-ERK and these are indicators of poor prognosis in primary melanomas of the oral mucosa, regardless of sun exposure...

Estudo genético do gene p16 pela técnica de PCR-SSCP e expressão de proteína p16 em melanomas de mucosa oral e melanomas cutâneos / Genetic analysis of p16 gene by PCR-SSCP technique and protein p16 expression in oral mucosa and skin melanomas

FUNDAMENTOS: A deleção e mutação do gene CDKN2a que codifica um inibidor específico da ciclina dependente de quinase 4, a proteína p16, têm sido implicadas na tumorigênese do melanoma cutâneo. Entretanto, pouco se conhece sobre essas alterações genéticas em melanomas de mucosa oral. OBJETIVOS: Verificar a presença de alterações no gene p16 e sua expressão protéica em melanomas esporádicos orais e cutâneos. MATERIAL E MÉTODOS: Avaliaram-se 36 espécimes de melanoma primário (sete orais e 29 cutâneos). Analisaram-se três exons do gene p16, pela técnica da reação em cadeia da polimerase/polimorfismo conformacional de fita simples do DNA.Verificou-se a expressão tecidual de proteína p16 por técnica imuno-histoquímica. Relacionaram-se os resultados com a espessura dos melanomas cutâneos. RESULTADOS: Cinco dos sete melanomas orais e 17 dos 29 melanomas cutâneos apresentaram indício de alteração no gene p16. Alterações do exon 2 foram as mais freqüentes, sendo 19 casos nos produtos obtidos com o mesmo iniciador. Observou-se expressão tecidual de p16 em apenas um melanoma oral, em 10/13 (76,9 por cento) casos de melanoma cutâneo de espessura até 1mm e em sete de oito (87,5 por cento) casos de espessura superior a 1mm. CONCLUSÃO: A freqüência de indícios de alteração na análise genética de p16 nos melanomas de mucosa oral foi de 71,42 por cento e de 58,6 por cento nos cutâneos. É possível sugerir a participação de alterações do gene p16 na patogenia do melanoma esporádico de mucosa oral. Não houve relação da sugestão de alteração genética do gene p16 e de sua expressão tecidual com a espessura dos melanomas cutâneos de diferentes subtipos histológicos.

BACKGROUND: Deletion and mutation of gene CDKN2a, which encodes a specific inhibitor of cyclin-dependent kinase 4 (CDK4), the protein p16, has been regarded as related to cutaneous melanoma tumorigenesis. However, little is known about those alterations in oral mucosa melanomas. OBJECTIVES: To verify possible p16 gene mutations and its protein expression in sporadic melanomas in oral mucosa and skin. MATERIALS AND METHODS: 36 primary sporadic melanoma paraffin-embedded specimens (seven oral mucosa and 29 skin lesions) were subjected to molecular analysis of exons 1, 2 and 3 of p16 gene using polymerase chain reaction/single strand conformational polymorphism technique. p16 protein expression was demonstrated by an immunohistochemical technique. Data obtained were correlated with tumor thickness. RESULTS: Five out of seven oral melanomas, and 17 out of 29 skin lesions displayed signs of alteration in p16 gene molecular analysis. Alterations in exon 2 of p16 gene were the most frequent. Protein p16 expression was observed in only one oral melanoma and in 10/13 (76.9 percent) skin melanomas up to 1.0 mm-thick and in 7/8 (87.5 percent) lesions thicker than 1.0 mm. CONCLUSIONS: Frequency of alterations disclosed by p16 gene molecular analysis in oral mucosa melanomas was 71.42 percent and 58.6 percent in cutaneous lesions. The obtained data suggest that p16 gene alterations play a role in the pathogenesis of sporadic melanoma of the oral mucosa. Neither protein p16 expression, nor p16 gene alteration had correlation with tumor thickness.